深靜脈血栓( deep vein thrombosis，DVT) 好發(fā)于下肢，常 繼發(fā)于手術、分娩、腫瘤等危險因素，尤其在骨科大手術后， 其發(fā)病率每年不斷上升。中醫(yī)藥在預防深靜脈血栓發(fā)揮 著重要作用。本實驗研究血府逐瘀湯對深靜脈血栓大 鼠模型血栓濕重的影響及血漿組織型纖溶酶原激活劑( t － PA) 、組織型纖溶酶原激活劑抑制物( PAI) 的影響?，F(xiàn)將實 驗方法與結果報告如下。

1 實驗材料

1. 1 動物

SPF 級 SD 雄性大鼠，50 只，體質量( 265. 83 ± 19. 53) g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，動物 合格證號: 43004700012066。

1. 2 藥物

血府逐瘀湯藥物組成符合《方劑學》中要求 ( 由桃仁 12g、紅花 9g、當歸 9g、生地黃 9g、川芎 4. 5g、赤芍 6g、牛膝 9g、柴胡 3g、桔梗 4. 5g、枳殼 6g、甘草 6g 組成) ，由湖 南中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院藥劑科提供道地藥材并煎制。 制備方法: 蒸餾水浸泡 1h，煮沸 30min 后過濾取液，再加水 殘渣煮沸，如此反復操作 2 次，合并 2 次濾液，濃縮至每毫升 含生藥 0. 684g，熬制完畢，將中藥放于立式壓力蒸汽滅菌器(上海博迅BXM-30R)里滅菌，放入 4℃冰箱冷藏備用。低分子肝素鈉: 4000IU/支 ( Laboratoire AVENTIS，批號: H20030601 － 605) 。

1. 3 儀器及試劑

JY3002 型電子天平( 上海精密科學儀器有限公司) ; Elisa 試劑盒。

2 實驗方法

2. 1 動物分組及給藥

將 50 只雄性 SD 大鼠隨機分成4 組， 血府逐瘀湯組( n = 13) : 灌胃血府逐瘀湯生藥 6. 84g /( kg·d) ; 低分子肝素鈉組( n = 13) : 每日肌內注射低分子肝素鈉， 600IU/( kg·d) ; 模型對照組( n = 13) : 灌胃用 0. 9% 氯化鈉 注射液 10ml /( kg·d) ; 假手術組( n = 11) : 灌胃用 0. 9% 氯 化鈉注射液 10ml /( kg·d) 。每組均給藥 7d。

2. 2 模型制備

給藥結束后對除假手術組外的其余 3 組參 照溫定文等方法建立深靜脈血栓動物模型。腹腔注射 1% 戊巴比妥鈉( 0. 1ml /20g) 麻醉大鼠后固定，腹部消毒后 沿其腹白線逐層打開腹腔，切口不能太大，下至凝固腺，上 至露出肝臟一角即可。將腹腔內小腸等器官拖出放置于大 鼠左側，暴露出下腔靜脈，動作要輕柔，避免損傷器官，拖出 的器官用浸潤過 0. 9% 氯化鈉注射液的紗布包裹，防止長期 置于空氣中造成脫水。移至體視顯微鏡下，鈍性分離血管 周圍結締組織，暴露下腔靜脈及其分支，在腎靜脈下方將腹 主動脈和下腔靜脈剝離開，然后用 7 /0 縫合線將下腔靜脈結 扎，之后逐個將其分支結扎。按解剖位置將腸道等器官放 回腹腔，在腹腔中加入 1% 氨芐溶液 0. 2ml，防止感染。用 5 /0 縫合線逐層縫合腹腔，術后置于 25℃ ～ 28℃ 的環(huán)境中， 直至大鼠復蘇，即可正常飼養(yǎng)。假手術組除不結扎下腔靜 脈及其分支外，其他操作同造模組。

2. 3 觀察指標

造模術后 72h 每組隨機取 5 只大鼠脫臼處 死，剖開腹部，移開小腸等器官，及時股動脈放血，分離血 漿，Elisa 試劑盒檢測 t － PA、PAI 水平; 暴露大鼠下腔靜脈， 置于體視顯微鏡下，截取下腔靜脈及分支靜脈結扎段，電子 天平稱取血栓濕重。 各組剩余大鼠于造模術后第 10 天脫臼處死，剖開腹部， 移開小腸等器官，及時股動脈放血，分離血漿，Elisa 試劑盒 檢測 t － PA、PAI 水平，并檢測其凝血常規(guī)及抗凝血酶Ⅲ 水平。

2. 4 統(tǒng)計學方法

實驗數(shù)據(jù)用 SPSS 21. 0 統(tǒng)計軟件包處 理。計量數(shù)據(jù)描述均采用均數(shù) ± 標準差( x ± s) 表示，經正 態(tài)性檢驗( kolomogorov － smirnov 法) ，方差齊性檢驗后，若滿 足條件，組間差異采用多個樣本兩兩比較方差分析檢驗 ( LSD 法) 。若不滿足條件，組間差異采用多個樣本兩兩比 較秩和檢驗。P ＜ 0. 05 為差異有統(tǒng)計學意義。

3 實驗結果

本組大鼠造模前無死亡，均造模成功，造模術后 2 只 ( 模型對照組和低分子肝素鈉組各 1 只) 死亡，死亡原因為 肺栓塞 1 只和腹腔內出血 1 只。

3. 1 血栓濕重

與假手術組相比，模型對照組濕重較重，差 異有統(tǒng)計學意義; 與模型對照組相比，低分子肝素鈉組、血 府逐瘀湯組血栓濕重較輕，差異均有統(tǒng)計學意義; 血府逐瘀 湯組和低分子肝素鈉組比較差異無統(tǒng)計學意義; 血府逐瘀 湯組和低分子肝素鈉組的抑制率均大于 30% ，提示有良好 的預防血栓形成的作用。( 見表 1)

3. 2 血漿

t － PA 和 PAI 水平 1) 血漿 t － PA。2 個時段組 內比較: 模型對照組與假手術組相比，差異無統(tǒng)計學意義; 與模型對照組相比，低分子肝素鈉組、血府逐瘀湯組血漿 t － PA含量較高，差異有統(tǒng)計學意義; 血府逐瘀湯組和低分 子肝素鈉組比較，差異無統(tǒng)計學意義。組內 2 個時段之間比 較: 同組術后 72h 與 10d 之間無明顯差異。說明低分子肝素 鈉組和血府逐瘀湯組有良好的促進血漿 t － PA 生成的作用， 但是對造模術后 72h 與 10d 之間的促進效果差別不大。 2) 血漿 PAI。2 個時段組內比較: 模型對照組與假手術組相 比，差異無統(tǒng)計學意義; 與模型對照組相比，低分子肝素鈉 組、血府逐瘀湯組血漿 PAI 含量較低，差異有統(tǒng)計學意義; 血府逐瘀湯組和低分子肝素鈉組比較，差異無統(tǒng)計學意義。 組內 2 個時段之間比較: 同組術后 72h 與 10d 之間無明顯差 異。說明血府逐瘀湯組和低分子肝素鈉組有良好的抑制血 漿 PAI 生成的作用，但是對造模術后 72h 與 10d 之間的抑制 效果差別不大。

4 討 論

血栓的形成是一個復雜過程，與血流動力學、血管壁、 血小板、凝血與纖溶活性等諸多因素有關。正常情況下，凝 血系統(tǒng)和抗凝系統(tǒng)處于動態(tài)平衡，如果凝血系統(tǒng)被激活，且 占優(yōu)勢時，則出現(xiàn)血栓性疾病。血府逐瘀湯作為深靜脈 血栓防治的重要代表方之一，具有活血化瘀、行氣止血功 效。本實驗從預防深靜脈血栓理念出發(fā)，對 SD 大鼠造模前 預防性服用血府逐瘀湯或低分子肝素鈉，實驗結果顯示，在 血栓造模術后 72h 血府逐瘀湯組及低分子肝素鈉組血栓濕 重與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義，血府逐瘀湯組及低分 子肝素鈉組血栓濕重無差異，說明術前進行血栓防治干預 能夠有效減輕血栓的形成且血府逐瘀湯與低分子肝素鈉作 用無差異。t － PA 和 PAI 對機體纖溶系統(tǒng)活性起到重要的 調節(jié)作用。本實驗結果顯示，血府逐瘀湯組及低分子肝素 鈉組促進 t － PA 與抑制 PAI 生成均優(yōu)于模型組，且在術后 72h 與術后 10d 2 個時段作用效果無明顯差異，說明術前進 行血栓防治干預能夠有效促進 t － PA 與抑制 PAI 生成，且作 用效果可持續(xù)一定時間。通過檢測造模后大鼠凝血相關指 標，發(fā)現(xiàn)其能夠刺激抗 AT － Ⅲ，縮短凝血時間。