紫杉醇( PTX) 從短葉紅豆杉的樹(shù)皮中分離得到而命名，其作用機(jī)制是具有獨(dú)特的抗微管作用，促進(jìn) 微管蛋白聚合及抑制微管的解聚，阻礙細(xì)胞內(nèi)骨架 合成，從而干擾有絲分裂 。它主要用于治療乳 腺癌、卵巢癌及非小細(xì)胞肺癌等 。PTX 是一種 疏水性藥物 ，因此，提高溶解性是 PTX 制劑的首 要問(wèn)題。目前，國(guó)內(nèi)外市售 PTX 制劑中除注射用 PTX 脂質(zhì)體( 力樸素) 為脂質(zhì)體載體外，均為聚氧乙 烯蓖麻油與乙醇作為溶媒制劑，其中聚氧乙烯蓖麻 油具有腎毒性、變態(tài)反應(yīng)和神經(jīng)毒性等不良反應(yīng)，應(yīng) 用受到很大影響。另外，PTX 作為細(xì)胞毒性的抗腫 瘤藥物，因?yàn)槿狈δ[瘤靶向性，甚至導(dǎo)致全身性毒性 ，特別是中性粒細(xì)胞減少癥等免疫性疾病，這 使得其臨床應(yīng)用受到很大限制。

1 材料與方法

1. 1 試劑和儀器

十八胺、N，N-二甲基甲酰胺、甲 酰胺、N，N-二環(huán)己基碳二亞胺、FA、HA、1-( 3-二甲氨 基丙基) -3-乙基碳二亞胺均購(gòu)自麥克林; 硼酸購(gòu)自 天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司; 十水合四硼酸 鈉、二甲基亞砜均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司; NH2-PEG2000-COOH、透析袋均購(gòu)自北京索萊寶科 技有限公司; PAMAM 購(gòu)自威海晨源分子新材料有 限公司; PTX 購(gòu)自大連美侖生物技術(shù)有限公司。儀 器為 H-J 磁力加熱攪拌器( 鞏義市裕華儀器有限責(zé) 任公司) ，PH400 基礎(chǔ)型酸度計(jì)( 安萊利斯有限公 司) ，TY96-11IV 超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)( 寧波新藝生物 科技葛粉有限公司) ，高速冷凍離心機(jī)( Thermo) ，電熱鼓風(fēng)干燥箱( 上海博迅有限公司) ，GOLD-SIM 冷 凍干燥機(jī)( 美國(guó)金西盟國(guó)際集團(tuán)) ，透射電鏡( TEM) ( 日立) ，動(dòng)態(tài)光散射( DLS) ( 美國(guó)布魯克海文儀器 公司) 。

1. 2 PAMAM 熒光標(biāo)記物的制備

利用 PAMAM 的氨基末端與異硫氰酸熒光素的異硫氰基可以共價(jià) 結(jié)合 的 化 學(xué) 反 應(yīng)，制備熒光標(biāo)記物。稱(chēng) 取 適 量 PAMAM，溶于磷酸鹽緩沖液( PBS，pH7. 4) 中，緩慢 滴加異硫氰酸熒光素的丙酮溶液。摩爾比為 PAMAM ∶異硫氰酸熒光素= 1 ∶1. 2。避光磁力攪拌 36 h， 透析袋中透析 3 d，離心除去未反應(yīng)的異硫氰酸熒光 素，凍干得到異硫氰酸熒光素標(biāo)記的 PAMAM 聚合 物。異硫氰酸熒光素在 488 nm 激發(fā)波長(zhǎng)下，顯示特 征綠色熒光。

1. 3 PAMAM-PEG 的合成

稱(chēng)取硼砂 1. 895 3 g、硼酸 1. 235 7 g 溶于 1 L 蒸餾水中，得到 pH8. 0 的緩 沖溶液，避光保存。將 PAMAM 2. 079 6 g 和 PEG 0. 141 0 g 溶于 20 ml 硼砂-硼酸緩沖液中，室溫，避 光，磁力攪拌 12 h( 轉(zhuǎn)速為 1 000 r/min) 。將反應(yīng)混 合物轉(zhuǎn)移至 50 kD 截留分子量的超濾管中超濾，轉(zhuǎn) 速為 4 000 r/min，30 min /次，共超濾 7 次，收集上層 液體，放入－20℃ 冰箱冷凍保存，后放入冷凍干燥機(jī) 中凍干，凍干后稱(chēng)重、密封保存，備用。

1. 4 HA-C18 的合成

稱(chēng)取 HA 100 mg，溶于甲酰 胺 20 ml，50℃ 水 浴 加 熱，磁 力 攪 拌 ( 轉(zhuǎn) 速 為 1 000 r/min) 直 至 完 全 溶 解，冷 卻 至 室 溫。加 入 1-( 3-二 甲 氨 基 丙 基) -3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 480 mg，N-羥基琥珀酰亞胺 290 mg，冰浴磁力攪拌 ( 轉(zhuǎn)速為1 000 r/min) 2 h，充分反應(yīng)，得到混合物 1。 稱(chēng)取十八烷胺 30 mg，溶于 15 ml 無(wú)水二甲基甲酰胺 中，充分溶解后，緩慢滴加至上述混合物 1 中，兩者 混合液在 60℃氮?dú)猸h(huán)境下攪拌 5 h，然后在氮?dú)猸h(huán) 境下室溫?cái)嚢?24 h。將上述反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至透析袋中 ( 截留分子量 7 000 D) 在水/乙醇( V /V，等容積比) 1 000 ml中透析 24 h，然后將透析過(guò)的上述混合液 在蒸餾水中透析 24 h。所得混合物離心除去不溶雜 質(zhì)，將所得液體放入－20℃ 冰箱冷凍保存，然后放入 冷凍干燥機(jī)中凍干后稱(chēng)重、密封保存，備用。

1. 5 FA-HA-C18 的合成

稱(chēng)取 FA 102. 3 mg，溶于 30 ml 二甲基亞砜中，使其充分溶解。稱(chēng)取二環(huán)己 基碳二亞胺 92 mg，N-羥基琥珀酰亞胺 33 mg，加入 上述液體中，室溫避光活化反應(yīng) 5 h。將上述 HAC18 用 15 ml 無(wú)水甲酰胺溶解，將 FA-N-羥基琥珀酰 亞胺-二環(huán)己基碳二亞胺濾液緩慢滴入上述含 HAC18 的無(wú)水甲酰胺溶液中，避光，磁力攪拌( 轉(zhuǎn)速為 1 000 r/min) 48 h。將反應(yīng)后的 FA-HA-C18 反應(yīng)液 轉(zhuǎn)移至透析袋中( 截留分子量 7 000 D) 在 NAHCO3- NA2CO3 緩沖液( NAHCO3 3. 34 g 和 NA2CO3 1 g 定 容至 1 L 雙蒸水中) 中透析 24 h。將透析過(guò)的上述 混合液，在蒸餾水中透析 24 h。所得混合物離心除 去不溶雜質(zhì)，將所得液體放入－20℃ 冰箱冷凍保存， 放入冷凍干燥機(jī)中凍干后稱(chēng)重、密封保存，備用。

2 結(jié) 果

用磁共振氫譜( 1 H-NMＲ 譜) 對(duì)合成所得產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征， PTX、PAMAM-PEG、FA-HA-C18 的特征峰說(shuō)明成功地將三組分引入到 PTX-PAMAM-PEG-FA-HA-C18 結(jié)構(gòu)中。見(jiàn)圖 1。

膠束的 PTX 載藥量 為 18. 50%，包封率為 50. 13%。圖 2 可見(jiàn)，膠束為結(jié) 構(gòu)規(guī)整、分散性好、粒徑較均一的球形膠束。另外， 從 DLS 測(cè)定結(jié)果中，還可得出膠束的平均粒徑約為 329 nm。將膠束加入乙腈中， 探頭超聲使得膠束結(jié)構(gòu)被充分破壞，過(guò)微孔濾膜，分 別于 0，1，2，4，6，8，12 h 收集續(xù)濾液，記錄其峰面積 分 別 為 3 672 301. 750、 3 532 999. 750、 3 618 709. 750、3 560 782. 875、3 568 750. 025、 3 626 341. 438、3 545 328. 250 μV · s，平 均 3 589 316. 263 μV·s，相 對(duì) 標(biāo) 準(zhǔn) 偏 差 ( ＲSD ) 為 1. 41%。在 12 h 內(nèi)峰面積穩(wěn)定，表明膠束穩(wěn)定性 較好。

3 討 論

分子物質(zhì)和脂質(zhì)在腫瘤組織透過(guò)性增強(qiáng)及滯留效應(yīng) 稱(chēng) 作 實(shí) 體 瘤 的 高 通 透 性 和 滯 留 效 應(yīng) ( EPＲ)  ，EPＲ 促進(jìn)了大分子類(lèi)物質(zhì)在腫瘤組織 的選擇性分布，可以增加藥效并減少系統(tǒng)副作用，本 研究基于 EPＲ 原理，將高分子聚合物與小分子化療 藥物的耦聯(lián)物，通過(guò)藥劑學(xué)手段結(jié)合到高分子材料 表面。PAMAM 是一類(lèi)目前得到廣泛應(yīng)用的樹(shù)枝狀 聚合物材料 ，其本身能物理包埋或化學(xué)結(jié)合小分子藥物，其表面的官能團(tuán)還能連接多種對(duì)機(jī)體某些 器官、組織和細(xì)胞有特異性相互作用的靶向配基，從 而將包封或者耦聯(lián)的藥物帶到病變部位實(shí)現(xiàn)主動(dòng)靶 向治療。