硝苯地平是當今治療心腦血管疾病最常見的一線藥物，主要用于高血壓、心律失常、心絞痛等病的治療。 該藥在發揮藥效的同時，常常會引起轉氨酶升高、黃疸 等藥物性肝損傷。甘草是一種歷史悠久、應用廣泛的 中藥，在方劑中常作為使藥，有“無甘草不成方”之說，在 中醫經方《傷寒論》一百一十三方中，多達七十七方含有甘草。

1 材料

1.1 儀器

LC-20 高效液相色譜儀（包括 LC-20A 真空在線脫 氣機、LC-20AT四元泵、CTO-10 AS柱溫箱、SPD-M20 A 檢測器）和 AUY120 電子天平均購自日本 Shimadzu 公 司；5427R離心機（德國艾本德公司）；VX-Ⅲ渦旋混合器 （北京踏錦科技有限公司）；BF-2000氮氣吹干儀（北京八 方世紀科技有限公司）；博迅HPX-9052MBE恒溫烘箱（上海博訊醫療設備廠）。

1.2 藥品與試劑

地西泮對照品（內標，美國 Sigma-Aldrich 公司，批 號：439-14-5，純度：99.7％）；甘草酸對照品和硝苯地平 對照品（阿拉丁公司，批號：1405-86-3、21829-25-4，純 度：99.73％、99.76％）；甲醇（國藥集團化學試劑有限公 司，批號：67-56-1，色譜級）；羧甲基纖維素鈉（CMC-Na， 批號：C8621-25g）和肝素鈉（批號：9041-08-1）均購自北 京索萊寶科技有限公司；乙酸乙酯和環已烷均為分析 純，水為超純水。

1.3 動物

SD大鼠，SPF（無特定病原體）級，♀，2月齡，體質量 （210±20）g，由安徽醫科大學實驗動物中心提供，動物 使用許可證號：SYXK（皖）2017-006。所有大鼠飼養在 溫度、濕度、燈光受調控的房間，給予正常飲食，在標準 環境飼養2周后開始實驗。

2 方法與結果

2.1 分組與給藥

將大鼠隨機分成對照組和實驗組，每組10只。實驗 組大鼠灌胃甘草酸 5 mg/kg[5 （] 溶劑為 0.5％CMC-Na 溶 液，給藥劑量按臨床成人常用劑量換算），對照組大鼠灌 胃等量的0.5％CMC-Na溶液，每日1次，連續14 d。第13 天夜里，將大鼠禁食過夜（晚上10：00－第2天白天實驗 前），但是自由飲水，于第14天灌胃30 min后，實驗組和 對照組大鼠同時灌胃硝苯地平 3 mg/kg[6 （] 溶劑為 0.5％ CMC-Na溶液，給藥劑量按臨床成人常用劑量換算）。

2.2 樣品采集

分別于給予硝苯地平前和給藥后0.25、0.5、0.75、1、 1.5、2、3、4、6、8、12、24 h從眼內眥取血0.5 mL，置于預先 加入肝素鈉的試管中，4 ℃下 3 000 r/min 離心 10 min， －20 ℃冷凍保存備用。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備

精密稱取硝苯地平對照品 3.0 mg，置于10 mL量瓶中，以甲醇溶解并稀釋至刻度， 混勻，得到質量濃度為 0.3 mg/mL 的硝苯地平貯備液。 準確稱取甘草酸對照品 10.0 mg，置于 10 mL 量瓶中， 用甲醇溶解并稀釋至刻度，混勻，得到質量濃度為 1.0 mg/mL的甘草酸貯備液。上述溶液均置于冰箱2～8 ℃ 保存備用。

2.3.2 內標溶液的制備

精密稱取地西泮對照品 1.00 mg，置于 100 mL 量瓶中，用適量甲醇溶解并稀釋至刻 度，混勻，得到質量濃度為 10.0 μg/mL 的內標貯備液。 精密量取內標貯備液 1.00 mL，置于 100 mL 量瓶中，用 適量甲醇溶解并稀釋至刻度，混勻，得到質量濃度為 100 ng/mL的內標溶液，置于冰箱2～8 ℃保存備用。

2.4 血漿樣品的處理

精密量取待測血漿樣品 200 μL，置于 1.5 mL EP 管 中，加入10 μL內標溶液（100 ng/mL），加入乙酸乙酯-環 己烷混合液（3 ∶ 1，V/V） 1 mL 萃取，渦旋 1 min，4 000 r/min 離心 5 min。取上清液 0.8 mL，置于干凈的 EP 管 中，55 ℃水浴加熱，N2吹干，并將殘余物用100 μL流動 相復溶，取20 μL上清液進樣分析。

2.5 色譜條件

色譜柱：ODS-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相： 甲醇-水（62∶38，V/V，乙酸調pH為4.5）；流速：1.0 mL/min； 柱溫：30 ℃；檢測波長：238 nm；進樣量：20 μL。

2.6 專屬性試驗

取空白血漿、加硝苯地平的空白血漿、大鼠灌胃后 12 h 時的給藥血漿各 1 份，按照“2.4”項下方法處理后 （其中空白血漿不加內標溶液），再按照“2.5”項下色譜條 件進樣測定，記錄色譜。結果顯示，硝苯地平和地西泮 的保留時間分別為9.6、5.9 min，血漿里的雜質不影響硝 苯地平的測定，硝苯地平和地西泮可以完全分離，峰形 良好，可見本方法具有專屬性高、分離度好的特點，可以 準確測定硝苯地平的濃度。

2.7 線性關系與定量下限的考察

將200 μL空白血漿，置于離心管中，加入10 μL內標 溶液（100 ng/mL），再分別加入50 μL不同質量濃度的硝 苯地平對照品溶液至終濃度分別為20、40、80、160、320 ng/mL。再按照“2.4”項下方法處理后（不再加內標溶 液），按“2.5”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以硝 苯地平質量濃度為橫坐標（x），以硝苯地平與內標峰面 積比值的均數為縱坐標（y），采用加權最小二乘法進行 線性回歸分析，得回歸方程為 y＝0.011x－0.006 6（r＝ 0.999 4），硝苯地平的檢測質量濃度在20～320 ng/mL線 性范圍內與峰面積呈良好的線性關系。以信噪比值＝ 10確定的定量下限為5 ng/mL。

3 討論

當今社會，臨床上中西藥結合治療已成常態。中西 藥聯用可以發揮各自優勢，取長補短，提高療效，但也會 不可避免地因兩者發生相互作用從而引起一系列不良 反應，其中代謝酶的改變是最主要因素之一。硝苯地平為肝臟主要代謝酶細胞色素P450（CYP）3A4的底物 ，而 甘草酸會誘導 CYP3A4 的活性，所以甘草酸有可能會 對硝苯地平的藥動學產生影響。



 

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